什么是Western Blot协议(Western Blot Protocol)？

Western blot协议是进行免疫印迹试验的准确标准。Western blot用于检测组织样本中的蛋白质。该过程通过使用凝胶电泳测定多肽的长度来分离天然蛋白质。然后将蛋白质自身转移到硝化纤维膜上进行探测通过抗体。护士wes...

Western blot协议是进行免疫印迹试验的准确标准。Western blot用于检测组织样本中的蛋白质。该过程通过使用凝胶电泳测定多肽的长度来分离天然蛋白质。然后将蛋白质自身转移到硝化纤维膜上进行探测通过抗体。护士western blot协议的第一部分从组织收集开始。这些样本要么从活组织中收集，要么从细胞培养物中收集。组织被分解，并引入各种抑制剂，如蛋白酶或磷酸酶，以防止酶进行消化。这该方案的一部分通常在低温下处理以保存组织。凝胶电泳过程是western blot协议的下一步。在这一部分，蛋白质可以通过分子量或电荷等多种因素来识别。这一过程通常是用聚丙烯酰胺凝胶和十二烷基硫酸钠缓冲液来完成的。基本上，蛋白质带负电，并在凝胶内向带正电荷的电极移动。蛋白质的转移整个western blot过程的下一个部分。在凝胶上放置一个薄膜，然后是滤纸。当通电时，蛋白质被拉入膜中。这被称为分析的实际"印迹"部分。膜非常脆弱，很容易受到损害。正确的western blot协议需要一个称为结合的步骤。为了防止抗体污染蛋白质本身这需要加上一种防护措施，最常见的是使用脱脂奶粉和洗涤剂这与膜上的开放点结合，当加入抗体时，可以得到更清晰的结果。根据正确的方案，检测是下一步。将蛋白质引入抗体中，抗体与一种特定的酶相连，这将为研究人员提供所需的信息。抗体与膜30分钟或更长时间。之后，清洗膜并引入第二抗体，与第一种抗体结合。通常，发光剂被用来帮助科学家进行鉴定过程。再次清洗材料以去除任何未结合的物质。对染色带大小的分析揭示了有关特定蛋白质突出程度和程度的信息。这通常要完成几次，以确保正确的分析。选项用于检测的包括x光、着色和化学药品。

发表于 2020-09-18 09:30
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分类：科学教育

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