什么是ELISA检测(ELISA Detection)?

酶联免疫吸附试验(ELISA)是在免疫学实验室进行的测定生物样品中蛋白质水平的试验。ELISA检测是指在试验的最后一步,将透明溶液或底物加入含有结合酶标记抗体的塑料板中,酶解底物然后在ELISA平板阅读器或分光光度计上测量...
酶联免疫吸附试验(ELISA)是在免疫学实验室进行的测定生物样品中蛋白质水平的试验。ELISA检测是指在试验的最后一步,将透明溶液或底物加入含有结合酶标记抗体的塑料板中,酶解底物然后在ELISA平板阅读器或分光光度计上测量最终着色溶液的光吸收率。酶联免疫吸附试验通常用于检测是否有接触艾滋病毒的迹象酶联免疫吸附试验有多种类型,最常见的两种是间接酶联免疫吸附法和夹心法,在病人血清中。间接ELISA试验的一个例子是用于检测抗HIV抗体的人类免疫缺陷病毒(HIV)试验。夹心ELISA试验通过在两个抗体之间捕捉蛋白质或抗原来检测蛋白质或抗原。检测妊娠期间升高的人绒毛膜促性腺激素(hCG),是用夹心ELISA测试来完成的。接受输血可能会无意中使个人接触到艾滋病毒两种检测方法在检测结束时都有一个ELISA检测步骤这一步包括添加一种带有酶分子的抗体。添加酶标记抗体后,一种无色溶液,含有该酶的特异底物分子,添加。酶裂解底物分子,溶液根据使用的组合改变颜色。通过测量颜色变化的强度来确定患者样本中抗体或抗原的数量在口对口抢救呼吸和心肺复苏过程中接触体液会使个人暴露于艾滋病毒。酶联免疫吸附法有几种酶-底物组合可供使用检测步骤。最常见的酶是辣根过氧化物酶(HRP),它可以切割底物分子邻苯二胺二盐酸盐(OPD)和四甲基联苯胺(TMB)等。OPD和TMB的裂解都会导致颜色变黄,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定这些底物的光密度或光吸收率,OPD在490纳米(nm)波长下测定光吸收率,TMB在450 nm波长下测量酶联免疫吸附法的检测过程包括使用分光光度计,它测量物体反射或吸收多少光酶联免疫吸附试验中另一种常用的酶是碱性磷酸酶。这种酶与底物对硝基苯基磷酸酯(PNPP)一起使用,并产生黄色溶液。PNPP在405nm波长处吸收光酶-底物组合通常是根据市场上可买到的酶标抗体,以及用什么设备来测量光吸收度,可用于ELISA检测的多种组合使得ELISA检测具有很高的通用性,是疾病检测和研究实验室的重要工具间接酶联免疫吸附法用于确定样本中是否存在某种类型的抗体以及浓度。
  • 发表于 2020-07-30 08:31
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  • 分类:医疗卫生

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