电磁辐射包括电磁频谱中一小部分的波长范围人类视觉上感知到的光是一种能量形式,即电磁辐射,它包括电磁光谱中一小部分的波长。伽马射线、X射线和其他400纳米以下的短波对人眼是看不到的,而且波长也不超过700纳米,例如红外光或无线电波。人类感知到的颜色范围从穿过彩虹的400纳米左右的较短的蓝色和紫色波到接近700纳米的红色。分光光度计在可见光范围内测量,在光谱的紫外和红外部分有一些重叠当我们看到一种颜色,例如绿叶,我们看到的是该物质所传递的光波长。就绿叶而言,植物细胞中一种叫做叶绿素的化合物吸收了太阳白光中的蓝色和红色波长,但对绿色的吸收不强。相反,绿色和接近绿色的波长被传输,植物看起来是绿色的。在任何给定的液体溶液中,某些波长的光吸收量大于其他波长。分光光度计引导一束白光穿过被研究的样品溶液。分光光度计的吸光度是被研究化合物吸收的光的量。这种光在不同波长范围内被吸收的量不同称为吸收光谱。吸收光谱有助于识别样品化合物。例如,有些植物色素吸收的波长与叶绿素不同,可以通过它们的吸收曲线图来区分,这些图中分光光度计的吸收率是波长的函数。吸收量最大的波长将在图上显示为尖峰,给每个化合物一个特征形状。溶液的浓度也可以从它的分光光度计吸光度推断出来这是通过兰伯特-比尔定律(也称为比尔定律)来实现的,这是一个通过另外两个因素将分光光度计的吸光度水平与浓度联系起来的方程式:消光系数和样品管的路径长度或宽度。消光系数是每种化合物不同的化学因素,但它可以通过在分光光度计中测试已知浓度的样品来确定,然后用比尔定律来求解同一化合物的未知浓度。
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