某些食物中含有生物素,例如菠菜。生物素是一种B族复合维生素—维生素B7。它是一种小分子,多个生物素分子可以与一个单抗或多克隆抗体结合。生物素也是水溶性的,这一事实使其在缓冲系统中比不溶于水的情况下具有更大的多功能性。为了获得更高的特异性,单克隆抗体抗体与生物素的结合通常比多克隆抗体结合更为可取。生物素分子可直接与感兴趣的抗体结合,也可以通过分子尾部连接,以获得更大的运动自由度。生物素配体亲和素存在于卵白蛋白中,它可以廉价制造且易于分离。多个亲和素分子将与每个生物素受体结合,放大单个抗体检测信号。当生物素抗体粘附到感兴趣的抗原上时,实验人员可以将复合物暴露于与荧光团结合的亲和素中,使复合物可检测。通过荧光成像,可以在光学显微镜下检测生物素抗体和亲和素结合配体,虽然生物素抗体和荧光标记的亲和素分子的制备和使用是抗原检测的常用方法,但仍存在利用生物素/亲和素复合物的替代品将生物素与一种类似神经毒素的配体结合,有助于检测受神经毒素影响的神经元受体的位置,也有可能将生物素与核苷酸序列结合,如信使核糖核酸(mRNA),以发现这些核苷酸序列在哪里被翻译成蛋白质或检测细胞mRNA调节。可以购买生物素化多克隆或单克隆抗体,尽管生物素化抗体的生产在许多实验者的能力范围内。可以在网上找到建议抗体生物素化方法的协议,虽然最容易遵循的协议直接将生物素与抗体连接起来,而不是建议如何插入分子间隔区。生物素与其相关抗体之间的分子间隔允许更大的间距使更多的分子暴露在结合位点上,而这些生物素抗体通常是购买而不是制造的。
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