病毒,其遗传物质可以存储为记忆RNA(mRNA)而不是DNA。在RNA扩增开始之前,必须首先从污染物质中分离出感兴趣的RNA序列。完成后,将酶逆转录酶添加到RNA模板中。逆转录酶用于创建与原始mRNA互补的碱基对的细胞DNA(cDNA)序列。第一条cDNA链可用于创建第二条可用于聚合酶链反应的cDNA链,一种通过重复的DNA复制循环和随后的两条链分离来放大DNA链的过程。cDNA通常在DNA序列的一端包含引物或酶,作为核苷酸结合的信号,从而产生与原始序列相同的mRNA链
RNA片段是大分子。有几种RNA扩增方法,但产生最大量忠实于原始拷贝的mRNA的方法称为模板转换法。这种方法使用Moloney小鼠白血病病毒的逆转录酶,它在从RNA模板中产生该链后,在第一链cDNA的末端添加一个引物区域。该引物区域也被添加到第二条cDNA链上,由此产生扩增的RNA拷贝。另一种酶,称为启动子,可与第二条cDNA上的引物区域结合,这大大增加了通过转录从这个cDNA链产生的RNA拷贝的数量。
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