什么是RNA定量(RNA Quantification)？

核糖核酸（RNA）定量是测定溶液中RNA平均浓度的一种方法。这种测定可通过多种程序进行，分光光度法通常分为两类：分光光度法或荧光染料定量法。分光光度法依赖于RNA吸收某些波长的紫外线的能力。一些荧光染料，如溴化乙锭，可以...

核糖核酸（RNA）定量是测定溶液中RNA平均浓度的一种方法。这种测定可通过多种程序进行，分光光度法通常分为两类：分光光度法或荧光染料定量法。分光光度法依赖于RNA吸收某些波长的紫外线的能力。一些荧光染料，如溴化乙锭，可以与核酸（如RNA）结合，并在结合时发出荧光，使其亮度用于定量核酸的染料将结合DNA和RNA，并且显示出相似的光度，因此确保RNA样本的清洁非常重要。当RNA暴露于紫外线下时，它将选择性地吸收波长为260纳米（nm）和280nm的光。此方法在分光光度计可以产生波长的紫外线，测量穿过RNA的光。浓度越高的RNA吸收的光越多。这两种波长的组合通常用于RNA定量，因为这种方法可以让研究人员了解样本是否被其他大分子污染，例如蛋白质。这些污染物通常会选择性地吸收280nm的光，但在260nm处不会吸收光。因此，计算两个波长吸收光的比率可以确定污染的程度。使用荧光染料对RNA进行定量分析得到的结果对某些污染物不太敏感，它可以与低水平的RNA一起使用，这会使分光光度法变得不可能如果没有光度计，可以制备已知RNA浓度的溶液，并将未知样品的光度与这些溶液进行粗略比较，光度与RNA浓度呈线性关系，因此，研究人员可以根据光度快速测定浓度。使用任何一种方法的RNA定量都对不同的污染物非常敏感。蛋白质、苯酚和大颗粒物都会使分光光度法的结果不准确。这些污染物不会影响荧光染料RNA的定量，但是这种方法可能会因为样本中存在脱氧核糖核酸（DNA）而变得不准确。结合核酸的染料会同时结合DNA和RNA，并且显示出相似的光度，因此确保RNA样本干净是很重要的。通常的方法是添加一种能破坏DNA的酶，例如DNAse，根据样品中RNA的浓度和存在的污染物，实验室可以使用这两种方法中的任何一种来定量RNA

发表于 2020-09-06 19:24
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分类：科学教育

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